药丸剂是药材细粉或药材提取物加适宜粘合剂或辅料,制成的球形或类球形的固体制剂,是中成药古老的剂型之一。PCR的DNA检测方案正在成为中药材真伪鉴定的金标准,但是加工后的中药丸由于成分复杂,包括粘合剂和辅料对PCR反应有抑制作用,导致DNA检测方法不能有效应用于这个领域。本试剂盒通过自主开发的DNA提取方法,对一些PCR抑制成分进行有效的清洗,从而达到有效的DNA提取纯度。提取的DNA可直接用于PCR反应,为药材的真伪鉴定和掺假检测提供了一个可靠的检测方案。
裂解处理:
将丸剂研磨成粉末,加入含蛋白酶K的裂解液(如CTAB缓冲液),56℃水浴1-2小时,破坏细胞膜并降解蛋白质。若样本含多糖,可加入β-巯基乙醇抑制干扰。
吸附纯化:
磁珠法:将裂解液与磁珠混合,DNA特异性吸附后,用含离液盐的洗涤液去除杂质。
离心柱法:裂解液过硅胶膜柱,DNA结合后,用乙醇洗涤盐分和色素。
洗脱与质检:
用TE缓冲液或无菌水洗脱DNA,紫外分光光度计检测A260/A280比值(1.8-2.0为合格)。电泳观察条带完整性,避免拖尾或弥散。
注意事项:
操作全程戴手套,避免DNA酶污染。
多糖含量高时,可增加洗涤次数或使用低pH值法。
陈旧样本需延长裂解时间。