双侧臂细胞培养转瓶是一种专为悬浮细胞或微载体大规模培养设计的高性能细胞培养装置,通过优化气体交换与搅拌效率,提升细胞生长密度与培养均一性。
应用场景:
生物制药研发:用于重组蛋白、病毒载体的细胞培养工艺开发;
组织工程:结合微载体进行干细胞扩增;
教学与质检:作为标准化培养容器用于实验演示与质量控制。
接种与培养操作:
无菌接种:
在超净台内打开瓶盖,将细胞悬液通过侧臂或瓶口无菌注入;
接种体积建议控制在瓶总容量的30%~50%,以保证足够气体交换空间。
连接气体系统(可选):
若需长期培养或高密度扩增,可将双侧臂分别连接进气滤器(含0.22μm滤膜)和出气阀,通入含5% CO₂的空气,维持pH稳定。
设置搅拌与温度:
将转瓶置于磁力搅拌器上,放入搅拌子;
启动搅拌,初始转速设为45rpm,避免剪切力过大损伤细胞;
设定温度为37±0.5℃,持续监控。
培养过程管理:
定期观察:
每日镜检细胞形态与密度,确认无污染、无结团;
观察微载体(如使用)是否均匀悬浮,无沉淀。
补液与传代:
根据代谢情况适时补充新鲜培养基;
当细胞密度达到平台期或活力下降时,进行传代或收获。
气体调节:
若pH持续偏高,可适当增加CO₂通气量;
长时间培养建议使用HEPES缓冲体系增强pH稳定性。
收获与清洗:
细胞收获:
停止搅拌,静置5分钟使微载体沉降;
轻柔吸出上清液,离心收集细胞;
或直接过滤分离细胞与微载体。
清洗与保存:
使用后立即用清水冲洗,避免残留物干结;
可重复使用,但需每次严格灭菌;
长期不用时应干燥密封保存。