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Protein A 残留检测试剂盒
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型号:ATH-ELA-PRA

更新时间:2022-01-19  |  阅读:3478

详情介绍

在单克隆抗体药物的纯化过程中,以蛋白A(Protein A)为基础的亲合层析是广泛应用的纯化方法之一,单克隆抗体可以有效的在此步骤中得到纯化。蛋白A 的最初来源是细菌(Staphylococcus aureus)细胞壁中的一个蛋白质,研究表明蛋白A 可能对人体有潜在的危害,它的生物学作用包括刺激人体多种细胞素(IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4)的释放。由于在蛋白A 亲合层析柱使用过程中会有微量的蛋白A 从层析柱上脱落下来,因此用灵敏的方法来确证单克隆抗体药物中蛋白A 的残留处于一个较低的和稳定的水平是单克隆抗体药物的质量标准之一。
蛋白A (Protein A) 酶联检测试剂盒是用来定量分析生物药物中蛋白A杂质的试剂盒。首先,用不同浓度的蛋白A标准蛋白制作一条标准曲线,然后再根据标准曲线来分析生物药物中残留蛋白A的含量。具体方法为:先将蛋白A标准蛋白或者待测样品适当稀释后加入已包被好抗蛋白A抗体的96孔平板中。经过1.5小时的保温,蛋白A与已经固定在平板上的抗体结合形成抗原-抗体复合物。此复合物被随后加入的生物素标记的抗蛋白A的抗体结合并进一步形成更高级的复合物,反应45分钟后洗去未结合的物质。再加入链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物(Streptavidin-HRP Conjugate),静置30分钟。因链霉亲合素可以与任何带生物素标记的抗体相结合,从而使链霉亲合素-辣根过氧化物酶复合物连接到平板上。接下来冲洗掉未结合的物质,加入TMB底物。固相上的酶催化底物产生颜色反应,待颜色反应一段时间后,终止反应。用酶标仪在450 nm波长下测定其结果,此结果能间接地反应结合到平板上的蛋白A数量的多少。根据蛋白A标准曲线定量分析生物药物中残留蛋白A的含量。


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